背景

脑胶质瘤是由于大脑和脊髓胶质细胞癌变所产生的一种最常见的原发性颅脑恶性肿瘤,约占颅内肿瘤的35%~61%。目前,虽然有手术、放疗、化疗、基因治疗及综合治疗等多种治疗方法,但因其侵袭性强、复发率高、位置特殊、预后差,具有很高的病死率和致残率,严重威胁人类健康。肿瘤细胞所处的微生态环境是其生长不容忽视的重要因素,建立一个可靠的能模拟人脑胶质瘤微环境以及生物学特性的动物模型,是进一步了解和研究胶质瘤发病机制及治疗方法的基础和前提。

01造模方法:

脑内原位接种整个接种过程在层流超净台进行,接种部位为裸鼠右侧大脑尾状核。裸鼠经0.8%的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(20mL/kg),俯卧位将其头部固定在脑立体定向仪上。75%乙醇消毒头顶部皮肤后,先于颅中线处眼裂后开1个垂直切口,暴露前囟。接种部位取前囟中点前1mm、矢状缝向右旁开2.5mm处,用直径为1mm的动物颅骨钻小心钻穿颅骨,然后用吸有5uL瘤细胞悬液的微量进样器经孔垂直进人脑白质区中,进针深度为针尖距颅骨表面3.5mm,注射前将针稍微退回约0.5mm,以0.5uL/mim注射速度将瘤细胞悬液缓慢注入,除针前停留2min后缓慢拔针,用骨蜡封闭骨孔,生理盐水冲洗术野,缝合头皮,最后用碘酒消毒。正常对照组接种时以同体积Hanks液替代。术后先将裸鼠置于37℃恒温板上保温,待苏醒后再放回笼中,术后无需抗感染治疗,每天观察其生活状态,包括精神、饮食、活动,体质量等情况。

02注意事项:

本模型制备的结果受多种因素的影响,为保证造模成功,造模过程要注意:①保证细胞活力及接种数量。保证细胞计数准确,尽量使细胞悬液的制备和裸鼠的麻醉、消毒、固定定位同时进行,以保证细胞悬液在最短时间内接种至裸鼠体内。另外,整个接种过程中要将细胞悬液置于冰上保存,用时摇匀,避免细胞贴壁、堆积,保持浓度均匀。②选择合适的接种部位。我们将人脑胶质瘤细胞U87-MG接种于裸鼠右侧大脑尾状核,坐标为前囟中点前1mm、矢状缝向右旁开2.5mm,深度为硬膜下3mm。选择此注射点的目的是保证肿瘤能在该位点的前后,左右、上下方向有足够的生长空间、从而保证肿瘤生长的大小和良好的生长形态。采取立体定向仪下准确的定位,既保证足够的深度,又防止肿瘤细胞进入侧脑室。3.防止肿瘤细胞沿针道扩散,我们采用进针3.5mm、回退0.5mm的方法,保证足够的接种空间;0.5uL/min的缓慢注射速度、注射后停针2min和骨蜡封闭骨孔的方法,防止细胞悬液外溢,保证准确的细胞接种数量④防止动物模型感染。整个手术过程在层流超净台进行,术前75%乙醇消毒头顶部皮肤,术后碘酒消毒伤口。本实验建立人脑胶质瘤原位移植裸鼠模型的关键在于准确定位接种点和严格控制接种量,同时要特别注意注射和拔针的速度以及停针时间,只有保证了瘤细胞的接种位置和接种数量的一致性,才能确保移植缩生长的一致性、稳定性和可比性。实验采用的动物为免疫缺陷动物,饲养环境要求高。

小动物成像图

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